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CNaOH为标定的氢氧化钠浓度，g／L。

1.3.5 细胞培养HepG2细胞和PATU-8988细胞培养在含体积分数90％RPMll640基础培养基、体积分数10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100g/L链霉素的培养基内。去离子水作为空白对照。

1.3.4 液相色谱-质谱联用测定COS样品成分液相色谱条件：色谱仪WatersaequityUPLC,检测器WatersaequityPDA，柱温45℃，流量0.3mL/min，进样量10L。MDA-MB-231细胞基础培养基为DMEM，其他条件同上。为了进一步了解COS潜在的抗肿瘤作用，首先以壳聚糖酶酶解法自行制备COS，建立基于分级处理的COS优化制备工艺，将获得的低相对分子质量COS产物对不同肿瘤细胞的抗肿瘤活性进行评价初筛，进而在作用最为显著的人乳腺癌MDA-MB-231细胞中进行量效关系评价及初步机制探讨。相对分子质量和去乙酰度影响其抗肿瘤活性，且低相对分子质量表现出更为明显的效果。空白组为同样步骤下1mL去离子水。

用流水冲至孔板无色，将小室取出，擦净内部底面后倒置拍照。1.3.3 COS的制备工艺最适酶解条件下得到的壳寡糖酶解液，经100℃水浴15min后10000r/min离心除酶。1.6.4 四种萃取剂的对比实验选用含量为5%的迷迭香酸粗品，用pH2～3的酸水溶解配制为1mg/mL样液，分别用等体积的正丁醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯和乙酸甲酯萃取后，测定所得产品的色度及迷迭香酸的含量，确定最佳的萃取剂。

1 材料与方法1.1 材料与试剂实验所用乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙醚、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、正己烷、重铬酸钾、硫酸钴、盐酸等分析纯试剂均采购国药集团化学试剂有限公司。1.4 迷迭香酸含量及色度测定1.4.1 标准品及样品配制用甲醇溶解标准品配置成0.2mg/mL迷迭香酸标准溶液。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：迷迭香酸，硫酸钴，乙酸甲酯，石油醚。以溶液色度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制色度标准曲线。

迷迭香现在全世界各国广泛栽培。分别用移液枪移取1mL、2mL、3mL、4mL500色度标准使用液到四个5mL容量瓶中，加蒸馏水定容（稀释后，色度分别是100、200、300、400）。

GL-20G-C高速冷冻离心机：上海安亭科学仪器厂。脱色率按下式计算：1.5 萃取溶剂的选择称取9份10g原料，用60mL酸水溶解，离心去除不溶物。耐高温能力强，可耐受长期240℃高温油炸而保持高抗氧化能力，可代替热不稳定的超氧化物歧化酶SOD作为自由基清除剂。RNF-0460卷式膜多功能小试设备：厦门世达膜科技有限公司

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：香兰素，乙基香兰素，米粉，已酸乙酯。从表中可知，三组份试样的重复性测定结果香兰素RSD为0.16%、0.24%、0.18%，乙基香兰素RSD为1.02%、0.93%、0.64%，可见该方法重复性良好。由表中可知，方法加标平均回收率香兰素和乙基香兰素分别为92.64～98.62和92.56～99.36，RSD分别为2.21%和2.48%，完全满足国家标准GB/T274172017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》的要求。2.4 回收率与精密度准确称取混合均匀的阳性样品6份，每份2g，每份加入0.2mL香兰素标准溶液储备液和0.1mL乙基香兰素标准溶液储备液，做加标回收率试验，每组进行6次平行进样测定，计算样品加标回收率RSD值，见表2。

声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。3 结论采用内标法标准曲线法对米粉中香兰素、乙基香兰素同时进行测定，20min内可以完成一次进样分析，具有简单易行、仪器分析时间短、准确度高、稳定性好、精密度高等优点，通过对样品的加标回收和样品中目标物质的反复多次验证，测试结果表明，完全满足国家标准NY/T15122014《绿色食品生面食、米粉制品》、GB107692010《食品安全国家标准婴幼儿谷类辅助食品》和广西状族自治区卫生院和计划生育委员会于2018年6月10日1制订实施的地方标准DBS45/051.12018《食品安全地方标准干制米粉》等标准规定的要求，本文为相关检测机构提供一定的应用价值和技术支持，为进一步对香兰素和乙基香兰素在食品中的检测提供一定的技术依据，为制订相应的检测标准提供一些理论参考。

2.5 重复性准确称取3份做加标回收率的样品2g，每份样品平行进样3次，计算出香兰素和乙基香兰素的含量及其RSD值，得到重复性结果，见表3。2.2 色谱图与方法线性将准确配制好的香兰素、乙基香兰素5个系列混合标准内标液和样品试样，在1.2.1条件下测定香兰素、乙基香兰素和内标已酸乙酯色峰谱面积，得到浓度为25g/mL香兰素、乙基香兰素标准溶液色谱图（图1）和样品色谱图（图2），以香兰素、乙基香兰素系列标准工作液的浓度为横坐标，以香兰素、乙基香兰素和已酸乙酯色谱峰面积的比值为纵坐标，绘制香兰素、乙基香兰素线性回归标准曲线如图3。

2.3 检出限取一空白样品2g，加入5g/mL香兰素和乙基香兰素混合标准溶液（此混标溶液中没加内标）1mL，按照试样制备方法1.4进行处理，在1.2.1色谱条件下平行进样测量6次，分别按照S/N和S/N=10计算出方法检测限和定量限，见表1从表中可知，三组份试样的重复性测定结果香兰素RSD为0.16%、0.24%、0.18%，乙基香兰素RSD为1.02%、0.93%、0.64%，可见该方法重复性良好。2.4 回收率与精密度准确称取混合均匀的阳性样品6份，每份2g，每份加入0.2mL香兰素标准溶液储备液和0.1mL乙基香兰素标准溶液储备液，做加标回收率试验，每组进行6次平行进样测定，计算样品加标回收率RSD值，见表2。由表中可知，方法加标平均回收率香兰素和乙基香兰素分别为92.64～98.62和92.56～99.36，RSD分别为2.21%和2.48%，完全满足国家标准GB/T274172017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》的要求。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：香兰素，乙基香兰素，米粉，已酸乙酯。2.2 色谱图与方法线性将准确配制好的香兰素、乙基香兰素5个系列混合标准内标液和样品试样，在1.2.1条件下测定香兰素、乙基香兰素和内标已酸乙酯色峰谱面积，得到浓度为25g/mL香兰素、乙基香兰素标准溶液色谱图（图1）和样品色谱图（图2），以香兰素、乙基香兰素系列标准工作液的浓度为横坐标，以香兰素、乙基香兰素和已酸乙酯色谱峰面积的比值为纵坐标，绘制香兰素、乙基香兰素线性回归标准曲线如图3。

声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。2.3 检出限取一空白样品2g，加入5g/mL香兰素和乙基香兰素混合标准溶液（此混标溶液中没加内标）1mL，按照试样制备方法1.4进行处理，在1.2.1色谱条件下平行进样测量6次，分别按照S/N和S/N=10计算出方法检测限和定量限，见表1。

2.5 重复性准确称取3份做加标回收率的样品2g，每份样品平行进样3次，计算出香兰素和乙基香兰素的含量及其RSD值，得到重复性结果，见表3。3 结论采用内标法标准曲线法对米粉中香兰素、乙基香兰素同时进行测定，20min内可以完成一次进样分析，具有简单易行、仪器分析时间短、准确度高、稳定性好、精密度高等优点，通过对样品的加标回收和样品中目标物质的反复多次验证，测试结果表明，完全满足国家标准NY/T15122014《绿色食品生面食、米粉制品》、GB107692010《食品安全国家标准婴幼儿谷类辅助食品》和广西状族自治区卫生院和计划生育委员会于2018年6月10日1制订实施的地方标准DBS45/051.12018《食品安全地方标准干制米粉》等标准规定的要求，本文为相关检测机构提供一定的应用价值和技术支持，为进一步对香兰素和乙基香兰素在食品中的检测提供一定的技术依据，为制订相应的检测标准提供一些理论参考

2 结果和分析2.1 实验条件的优化2.1.1 气相色谱条件的选择气相色谱条件的选择和优化主要涉及到仪器的检测器、进样口和毛细管柱及其升温程序、柱流速，目前实验室常用的安捷伦气相检测器有4种分别是FPD、NPD、ECD、FID、FPD、NPD检测器主要检测农药残留，故未考虑，经过试验和查找相关资料，ECD检测器对香兰素、乙基香兰素的响应值很低，基本不出峰，而FID检测器对香兰素、乙基香兰素响应值很高，选择检测器温度250℃、300℃、320℃和选择进样口温度200℃、250℃、270℃进行多次试验，发现检测器温度300℃和进样口温度270℃时三种物质峰形最好且分离效果最好。本试验主要考察了毛细管柱DB-FAAP（50m0.32mm0.50m）、DB-1（15m0.32mm5.0m）、HP-1（25m0.32mm0.25m）、HP-5（30m0.25mm0.25m）、DB-1701（30m0.32mm0.25m等毛细管柱的分离效果，尤其对DB-1（15m0.32mm5.0m）、DB-1（30m0.25mm0.25m）、HP-1（25m0.32mm0.25m）三种规格的毛细管柱进行多次实验验证，发现毛细管柱的膜厚对峰形有较大的影响，5.0m膜厚的峰形更尖锐对称且分离时间更短，结果表明选择极性柱和中极柱时，三种组分基本不出峰或峰形很差，针对DB-1（15m0.32mm5.0m）毛细管柱进行程序升温和恒温设置，以及不同柱流速下的出峰情况进行多次验证，恒温120℃、180℃、210℃、时间30min以及程序升温90℃（2min）-10℃/min升至220℃（5min）等条件下和柱流速为0.5、1.0、1.5、2.0mL/min几种情况下的标样的色谱图，发现恒温条件下三种物质的分离不是太好，且需要较长时间，而程序升温明显提高色谱柱的分离度，当柱流速大于1.5mL/min，由于毛细柱为15m，溶液出峰时间过于靠前，峰形不太好，当柱流速小于0.5mL/min，就降低了工作效率，出峰时间过长，所以最终选择色谱条件为1.2.1。

米粉，以大米为主要原料，经浸泡、蒸煮、压条等工序制成的条状、丝状米制品，深受广大消费者的喜爱，历史比较悠久，据传是古代中国五胡乱华时期北方民众避居南方而产生的食品。旋涡混合器XW-80A：上海弛唐电子有限公司。进样量1L（衬管为5190～2295），分流进样，分流比5∶1，色谱柱：DB-1（15m0.32mm5.0m）。2.1.2 内标物的选择内标法与外标法相比，主要优点是消减了仪器进样过程中进样体积的变化对检测结果的影响，能提高分析结果的准确度，选择实验室常用的有机试剂乙腈、甲醇、已酸乙酯作为内标物，经过多次实验，发现已酸乙酯为内标物最好，20g/mL已酸乙酯时，峰面积为83.6。

已酸乙酯（C8H16O2，CAS：125-66-0，色谱纯）、乙醇（C2H4O，CAS号：64-17-5.色谱纯）：上海麦克林生化科技有限公司。25g/mL香兰素峰面积为119.6。

分析天平ME204T/02：梅特勒仪器有限公司。25g/mL乙基香兰素峰面积为107.8，而且三者的化学性质相似，三者互溶，已酸乙酯是米粉中不可能存在的物质，内标物已酸乙酯的量接近于被测组分香兰素、乙基香兰素，但不会发生化学反应，所以最终选择已酸乙酯作为内标物。

1.3.2 分别吸取香兰素、乙基香兰素标准储备溶液0.05、0.10、0.25、0.40、0.50mL分别准确称取于10mL的容量瓶中，加入0.2mL已酸乙酯，以乙醇定容至刻度，依次配制成香兰素、乙基香兰素标准溶液为5、10、25、40、50g/mL系列混合系列内标标准工作液，现用现配。1.4 试样制备及测定称取混合均匀的米粉样品2g（精确至0.001g）于15mL离心管中，加入10mL乙醇，加入0.2mL已酸乙酯标准溶液储备液，涡旋混匀2min，10000r/min离心5min，再用0.22m气相滤头过滤于进样瓶中，待测。

根据相关报道和文献资料，目前对食品中香兰素和乙基香兰素检测液相法或液质法较多，而气相法较少，液相法或液质法中处理样品所用的有机试剂较多是已烷或乙腈，本方法主要探讨利用安捷伦7890B气相色谱FID检测器，用乙醇（相较于已烷或乙腈，更安全）为提取液，已酸乙酯作为内标，优化色谱条件，实现了香兰素和乙基香兰素两种物质的分离，方法灵敏准确、操作简单，是定量检测米粉中香兰素和乙基香兰素含量的理想方法。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：乙基香兰素，香兰素，乙醇，米粉。在1.2条件下25g/mL香兰素、乙基香兰素混合内标液中，已酸乙酯的塔板数为128499，分离度为34.54，香兰素的塔板数为268807，分离度为54.37，乙基香兰素的塔板数为236058，分离度为8.63，三者完全分离且效果很好，能满足标准规定的要求，三组分在20min内完成分离，分离效果最理想。旋涡混合器XW-80A：赛默飞世尔。

1 材料与方法1.1 仪器与试剂气相色谱仪：安捷伦7890B（配有FID检测器，7693液体自动进样器和150位进样盘）。婴幼儿米粉（又称婴幼儿米糊），以大米、小米为主要原料，添加适量的营养强化剂，加工制成的适合6个月以上婴幼儿的补充营养的辅助食品，是婴幼儿谷类辅助食品之一，品种繁多，是不少婴幼儿比较喜爱和家庭常见的食物。

声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。恢复食品香味，强化特征味道。

在国家标准GB27602014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定，0～6个月的婴幼儿配方食品不得添加任何食品用香料，香兰素在婴幼儿谷类辅助食品中可以使用，但最大使用量不得超过7mg/100g，美国食品香料与萃取物制造者协会（FEMA）建议软饮料中的香兰素的用量6.3mg/100g，目前对香兰素和乙基香兰素没有相应的国家检测标准和方法，香兰素和乙基香兰素虽然是很安全的食品添加剂，但加了超量香兰素的米粉可能会影响婴幼儿对此类食品的依赖性，而且大剂量摄入香兰素可能致人体肝肾损害，尤其是婴幼儿。香兰素（C8H8O3，CAS：121-33-5，色谱纯）、乙基香兰素（C9H10O3，CAS：121-32-4，色谱纯）：上海易恩化学技术有限公司。